يدرماني رايج مانند جراحي و شيمي درم

ي
درماني رايج مانند جراحي و شيمي درماني به صورت تهاجمي و عوارض جانبي هستند، امروزه تحقيقـات بـه منظـور
يافتن تركيبات طبيعي با اثرات جانبي كمتر حايز اهميتاند. در اين مطالعه از سم زنبور عسل، پپتيد مليتين با 26 اسـيد
آمينه جداسازي و تخليص شد و تاثير آن بر ميزان زنده بودن و تكثير سلولهـاي سـرطاني معـده مـورد بررسـي قـرار
گرفت.
روش بررسي: ابتدا مليتين توسط كروماتوگرافي مايع با كارايي بالا- فاز معكوس (RP-HPLC) و با استفاده از ستون C18
از زهر زنبور عسل استخراج گرديد. فعاليت بيولوژيكي مليتين بهوسيله تست هموليتيك بر روي گلبولهاي قرمز نسبت
به استاندار مليتين بررسي گرديد. جهت بررسي تاثير مليتين بر زنده بودن و تكثير سلولهاي سرطاني معـده رده (AGS)
Human Gastric Adenocarcinoma Cells، ســلولهــاي مربوطــه در پليــت 96 خانــه كــشت داده شــدند و بــا
غلظتهاي مختلف مليتين در زمانهاي 6 و 12 ساعت تيمار و ميزان مـرگ و ميـر سـلولهـا بـه روش رنـگ سـنجي
.گرديد تعيين نانومتر 540 موج طول در MTT ( (3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5- diphenyltetrazolium bromide
يافتهها: كروماتوگرام حاصل از RP-HPLC مشخص نمود مليتين 50% زهـر مـورد مطالعـه را تـشكيل مـيدهـد. آنـاليز
فراكشن مليتين توسط SDS-PAGE خالص بودن آن را تاييد نمود. آزمـون هوليتيـك نـشان داد مليتـين اسـتخراج شـده
فعاليت هموليتيك بالايي (HD50=0/5µg/ml) از خود نشان ميدهد. آزمون MTT نشان داد مليتين در غلظتهاي بـالاتر
از 2µg/ml به شدت رشد سلولهاي سرطاني معده را مهار ميكند. اين اثر مهاري وابسته به غلظت مليتين و مدت زمان
اثر ميباشد.
نتيجهگيري: نتايج اين پژوهش نشان داد كه مليتين مهار كننده قدرتمند رشد سلولهاي سرطان معده ميباشد. همچنين
مشاهده گرديد اين اثر مهاري با افزايش غلظت مليتين و مدت زمان اثر، افزايش مييابد.
كلمات كليدي: مليتين، سرطان معده، كروماتوگرافي فاز معكوس.

زهر زنبور عسل در پزشكي سنتي شرقي همواره به عنوان دارويي
در درمان بيماريهاي مختلفي همچون آرتريت روماتوييد و همچنـين
2و1 جهـت كاهـش دردهاي عضلاني مورد استفاده قرار ميگرفته است.

اين ماده حاوي 18 تركيـب متفـاوت هـمچـون آنـزيمهـا، پپتيـدها و
آمينهاي بيولوژيك ميباشد. مهمترين پپتيدهاي موجود در زهر زنبور
مليتين، آپامين، آدولاپين و پپتيد دگرانوله كننده ماست سل ميباشند و
از آنزيمهاي موجود در آن مـيتـوان بـه فـسفوليپاز A2 اشـاره نمـود.
همچنين از آمينهاي فعال بيولوژيكي زهر زنبور عسل از هيـستامين و
مقدمه
مجله دانشكده پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي تهران، اسفند 1391، دوره 70، شماره 12، صفحههاي 760 تا 767 مقاله اصيل
چكيده تاريخ دريافت مقاله: 1391/06/06 تاريخ پذيرش: 1391/09/25

جداسازي مليتين از زهر زنبور عسل و تاثير آن بر رشد سلولهاي سرطان معده 761
http://tumj.tums.ac.ir
Tehran Univ Med J (TUMJ) 2013 March;70(12):760-7
مليتين (Melittin) يـك پپتيـد 26 اسـيد 4و3 اپينفرين نام برده ميشود.
آمينهاي، كاتيونيك و آمفيپاتيك ميباشد و اصليترين تركيب موجـود
مليتين 40 تا 50 درصـد وزن 5 در زهر زنبور عسل محسوب ميگردد.
خشك زهر زنبور را تشكيل داده و مقدار ترشح آن در زهر بـسته بـه
تغذيه و نژاد زنبور متغير است. از 26 اسيد آمينه موجود در سـاختمان
مليتين 20 اسيد آمينه انتهاي آمين پپتيد به طور عمده آبگريز بوده در
حالي كه اسيدهاي آمينه انتهاي كربوكسيل آن (اسيدهاي آمينـه 21 تـا
26) بيشتر آبدوست ميباشند. ايـن سـاختمان دوگانـه دوسـت بـه
مليتين امكان واكـنش بـا غـشاهاي فـسفوليپيدي و تخريـب آنهـا را
6و5 ميدهد.
تاكنون خواص مختلفي براي مليتين گزارش شده است كه از ايـن
قبيل ميتوان به اثرات ضد ميكروبي، ضد ويروسي، ضد التهابي و ضد
در سالهـاي اخيـر مهـار سـلولهـاي سـرطاني 7 سرطاني اشاره نمود.
تخمدان، سينه، كبد و ريه توسط زهر زنبور عـسل و مليتـين گـزارش
علاوه بر اين، مطالعات نشان داده است كه اثرات سـمي 9و8 شده است.
مليتين بر سلولهاي سرطاني بسيار بيشتر از سلولهاي طبيعـي بـدن
در سـال 2000 سـرطان معـده دومـين سـرطان كـشنده و 10 ميباشـد.
چهارمين سرطان شايع در سراسر جهان بوده است. ساليانه 650 هـزار
مرگ در اثر اين بيماري و 880000 مورد جديد آن گزارش ميگـردد.
در 11 حدود دو سوم اين موارد در كشورهاي در حال توسعه ميباشـد.
ايـران سـرطان معـده در رتبـه دوم ابـتلا بـه سـرطانهـا قـرار دارد و
شايعترين سرطان در ميان مردان و سـومين در ميـان زنـان محـسوب
پراكنش اين بيماري در سراسر كشور يكنواخت نبوده، بـه 12 ميگردد.
گونهاي كه استانهاي شمالي و شمال غربي بيشتـرين و اسـتانهـاي
جراحي، شيمي درماني و 13 مركزي كمترين آمار ابتلا را دارا ميباشند.
راديوتراپي از جمله روشهاي مورد استفاده در درمـان سـرطان معـده
محسوب ميگردند كه در بيشتر موارد به علت تـشخيص در مراحـل
پيشرفته بيماري، با شكست مواجه ميگردند و هـمچنـين روشهـايي
14 تهاجمي و داراي عواقب جانبي زياد هستند.
با توجه با معايب روشهاي درماني موجـود نيـاز بـه اسـتفاده از
تركيبات و روشهاي نوين به ويژه تركيبات طبيعي موجود در طبيعت
در كنترل و درمان سرطان معده بيش از پيش احساس ميگردد، لذا در
اين مطالعه اثر مليتين جدا شده از زهر زنبـور عـسل بـومي ايـران بـر
تكثير سلولهاي سرطاني معده مورد بررسي قرار گرفت.

مواد: در اين مطالعه تـريفلورواسـتيك اسـيد (TFA)، اسـتونيتريل
(MTT) ،(ACN)، ديمتيــل سولفوكــسايد (DMSO) و تريپــان بلــو از
مـورد مـواد و (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) سيگما شركت
استفاده در كشت سلول از قبيل محيط كشت RPMI 1640، پنيسيلين و
استرپتومايــسين، FBS و تريپــسين از شــركت گيبكــو ,Gibco-BRL)
(Paisley, UK خريداري گرديـد. سـلولهـاي آدنوكارسـينوماي معـده
انساني رده AGS از بانـك سـلولي انـستيتو پاسـتور تهـران خريـداري
گرديد. مطالعه حاضر به صورت آزمايشگاهي (In vitro) در آزمايشگاه
ونوم و توكسين انستيتو پاستور تهران از تابستان 90 تـا بهـار 91 طـي
مراحل زير انجام گرديد.
زهر زنبور عسل به كمك دستگاه شوك الكتريكي جمعآوري زهر
به اين منظور صـفحه 15 زنبور و مطابق با پروتكل Benton تهيه گرديد.
شيشهاي دستگاه به گونهاي در برابر ورودي كندو قـرار داده شـد كـه
زنبورهايي كه قصد ورود به كندو را داشتند مجبور به فـرود بـر روي
اين صفحه شيشهاي پوشيده شده از سيم مـيشـدند. پـس از رسـيدن
زنبورهاي موجود بر روي صفحه به تعداد مناسب، جريـان الكتريكـي
ضعيفي در سيمها برقرار گرديد. زنبورهـاي عـسل در پاسـخ بـه ايـن
شوك الكتريكي ضعيف بلافاصله اقدام بـه گـزش صـفحه الكتريكـي
نمودند. زهر در معرض هـوا بـه سـرعت بـر روي صـفحه شيـشهاي
خشك ميگردد و پس از خشك شدن از روي صفحه تراشـيده و بـه
آزمايشگاه منتقل گرديد.
در اين روش زهرگيري هيچ آسيبي به زنبور وارد نميگردد. زهـر
استحــصال شــده در آب ديــونيزه اســتريل حــل گرديــده و

結果 (日本語) 1:

J攻撃し、amrosh 視点で達成 dermani 梁の側面で撮影 Dermani 怒り mannd 外科医と習慣M ahmitand hais として自然配合の Yaftn BA athrat 側面。アリゾナ州 cm ホーネット蜂蜜 3 پپتيد en BA 26 の手を読んでデアAmina gdasasi、RID と彼のバランスの義腕ボーデンと述べた解像度ペリスのキロソロラ rtani を乗じて、影響گرفت。ロッシュ berrsi: 3 en はアリゾナ州石 C18 を仲介 كروماتوگرافي BAA バラ karaii マイア逆 (クロマトグラフィー) と BA を始めましたアリゾナ州 Zahr ホーネット蜂蜜エキス گرديد。بيولوژيكي を失った bhosilh テスト hmolitik 3 en バール ロイ گلبولهاي クリムゾン起因によって astandar berrsi گرديد 3 en。その berrsi 効果 3 en 義彼の前腕ボーデンと slolhay 応答 (AGS) と癌の増殖ヒト胃腺癌細胞、ローラ ・ デル ・ پلي t 96 彼を釘付けする Khan Daddah u dend マイクロ各種、b と、Ghalzothai 様々 な 3 en der zmanhai 6、ティマルとバランス m 雑巾 MI t o b e ゴキブリ ウォーレン GAF o ニー ローラから 12。 گرديد セット nm 波長さ 540 der (MTT (3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium ブロマイド擬人化 BL クロマトグラフィー 3 en モデルのおよそ 50% 知られているワードプレスの e RA t シャキール m 手 d Yafthha: كروماتوگرام を保持します。エリーゼFrakshan 3 en 仲介 SDS-PAGE 誠実なボーデン RA モデルをサポートします。温家宝は、St の tkherag として勝つ私のお父さんの holiti k n を供給します。私の心 hmolitik を失った (HD50 = 0/5 μ g/ml) アリゾナ州 khod 撃ち midhed。Azmon MTT 撃ちお父さん 3 en der ghalzothay b alatarBL 2 μ g/ml 魅了 Rushd slolhai 癌胃領域メヘル mikend。彼女は厚く 3 en wabsth のスキルに影響を与えるし、氷のいつでもMibashad の影響。نتيجهگيري: ntaig、پژوهش を撃ちお父さん Ke 3 en メヘル kenndh kodrtmnd Rushd slolhai がん胃 mibashad。همچنينگرديد を参照してくださいどこ影響熟練した BA avzaish の彼女は厚く 3 en といつでもアイス、avzaish miiabd。女性として言葉: 3 en、伝染性の癌、كروماتوگرافي、逆に勝った。ホーネットの花の蜂蜜・ デル ・東 2 年間 پزشكي hmoarh タイトル植物Der bimarihai همچون artrit Darman 異なる romatoied と همچن 円2 と 1 は手 t u derdhai adalani Kah リソース アクセス決定 ميگرفته です。第 18 温 مچ zimh、によって پپتي からコンテナー インストール千人の観客とAminhay بيولوژيك mibashad。Mhemtrin 既存の پپتيدهاي ・ デル ・花・ ホーネット3 en、اپامين、ادولاپين、پپتيد دگرانوله kenndh マスト細胞 mibashand とアリゾナ州 anzimhai には、その m と سفوليپاز A2 参照名が存在しています。همچنين アリゾナ州効率的な aminhai بيولوژيكي 花ホーネット蜂蜜フィズは stamin orising f です。導入雑誌 danshakdh esfand پزشكي、پزشكي テヘランの大学科学、1391 年、70 数 12、safhahhai 760 Ta 767 本物Ïñíçýê の記事の چكيده の歴史: 1391年/06/06 پذيرش 日付: 1388年/09/25Gdasasi 3 en BL 花スズメバチの蜂蜜と影響する感染癌 slolhai 761-Rushd の義http://tumj.tums.ac.irテヘラン大学 Med J (TUMJ) 2013 年 3 月; 70 (12): 760-73 en (メリチン) j k پپتي d 26 だけでなく 4 と 3 の اپينفرين、ナム ・ バルダ ミショー リン。木下 Aminhai、kationik、امفيپاتيك mibashad と aslitrin インストール3 en 40 50 Ta ders d 重量 5 ・ デル ・ ホーネットの花蜂蜜計算 ميگردد。Khshak 花ホーネット エリア 6 b e によって Daddah と溶出・ デル ・花の量を形成フィードと変数の東・ ホーネット Nezhad。BL 26 酸アミンは現在 der x akhtman です。3 en 20 酸アミン anthai ابگريز 市長相長官 پپتيد der の前兆現在 Ke asidhai Amina anthai カルボン酸 (asidhai アミン 21、26) 入力した値は、abdost mibashand を超えています。すべて n o akhtman دوگان e DOS t b eWak でした私のシャー 3 en b g p سفوليپيدي を発信し、RA によって妨害6 と 5 の midhed。別の Taknon 特性獲物 3 en Gozaresh 強度東柯 AZ n がどのようWeirosi と炎症性戦に対して、AEA に対して athrat によって mitwan などDar は、まあまあ r エース rtani ローラ 7 癌性参照モデル兄を尋ねた。彼らは外出セーヌ川、肝臓、シリア媒介花ホーネット p 売り上げ高、Millette 円 GAF zarshさらに、本土の測定値は、MI 9 と 8 強度 x ダダ東柯 athrat を射撃します。前癌性 slolhai 3 en フィズ slolhai Siar 入力値がデン自然より大きいDer x 2000 x シャンダとダー Dum 円 o がんのがんと 10 mibash d。چهارمين ・ デル ・ srasr フィールド セイがん・ ジャハンの前兆。訪問 Salianh 650 eマーグ Dar どこに影響を与える bimari、880000 新しいリソースその Gozaresh エコー ميگ。・ デル ・ kshorhai ・ デア ・資源・ デ ・ ソムの der 11 限界が拡大 mibash d。DOM レベル 8 月に続いて x ダ der イランのがん"セイウチや解像度の専門用語とShaiatrin ・ デア ・がんミアン マルダンと q 分 der 美禅その特定の SOPDer srasr bimari アンタッチャブル yknoakht nbodh、b 12 ميگردد で پراكنش。گونهاي Ke astanhay 北部と北西部のレンヌ Pecht とタン、外科的習慣 dermani ラマーとして 13 2 中央 OL ダラ mibashand を防止します。راديوتراپي アリゾナ州間 der roshhai リソース da その DRM 癌計算された ميگردند Ke Dar の入力値がそのリソース管制 v shkhees der 段階より大きいBimari, پيشرفته BAA shkst に直面する ميگردند e مچن 円ラウシェアル II14 を攻撃する間は、Ziad の結果を側します。Roshhai iPod 故障 dermani NI AZ b e s の下で学んだ BL 行ったメエ メエ組み合わせと特別な自然の組み合わせによって roshhay ミャワディミンジーウーサ der 自然が存在します。Durman がん胃 Bish アリゾナ州 پيش ميگردد 感覚、そうデア ・ デル ・ kentrl効果を読んで非常に強く 3 en BL zenb 花または GS b MI cel イラン b tがん胃 slolhai リソース berrsi گرفت 解像度の増殖。材料: t riflorwas (TFA) として TIC を読むに tonitril(MTT) (ACN) solfok 側 (DMSO) dimeti とも BL تريپ谷 (シグマ ・ アルドリッチ、聖 Louis, ミズーリ, USA) と سيگما (プル)Dar kisht slol AZ RPMI 1640 kisht、پنيسيلين などにアクセスし、استرپتوماي 銭、FBS と تريپ o BL u 左 گيبك、Gibco BRL)(ペイズリー、英国 kheridari گردي o 先生ローラいくつかの任意の adnokars ynomai人道対応 AGS BL その k o Luli Tor 呼び出し走った他あえてその stito پاسگرديد。ازمايشگاهي (In vitro) der ازمايشگاه によって撮影された出席者を読む睡眠と r 19 j の毒素 anstito پاستور アリゾナ州テヘラン tabestan 90 tZer anjam گرديد の段階。袖 دستگاه フォーク alketriki gmaaori ・ ブロッサム ブロッサム ホーネット ハチミツ視点でタグ午前ページ 15 ホーネットと一致する BA پروتكل گرديد theih ベントン。Shishhai گونهاي der ルディ小剣道解像度 Daddah u d k e دستگاهロッド b r ロイに剣道 RA dashtnd Gabriel によって Znborhaii Ke インテント領収書で shishhai ページ پوشيده 強度 BL SIM m WESH ライダーディ エンド。PE (ペルシャ語) アリゾナ州 o SR ライデンZenborhai に名誉を与えるロイが存在するページの適切な国勢調査はずっと電気 j視覚的には der brkrar گرديد simha。Zenborh 任意の販売・ デル ・ پاس g b nGAF ゼッシュ ・とげ alketriki 弱い blavaselh フィートよページ電気 jNmodend。ブロッサム デア ギャラリー e b h o 主催 r. ロイ y ページ市ソポール男 19 国Khshak ميگردد & çò khshak und krielg ATTAC BL ロイ Trach ページ手と b eازمايشگاه گرديد (STD)。ホーネット区 نميگردد でロッシュ زهرگيري هيچ assibi でデア。T パークエル ・ デル ・ AB ・ デ ・ گردي の証跡として wenish を代表して、

結果 (日本語) 2:

J
Dermana Wrage Mannd外科手術とShemi Dermana視点によって梁とThajma
Hustnd、Amrose調査の両側によって描かKmitr Haaz Ahmatandの両側の自然な組み合わせBaの影響Aavcn。博士ウェインのBLセンチスズメバチの蜂蜜、ペプチドMlitinのBa 26酸の研究
アミナJaddasazaと彼の腕ボーデンの義と資源決定の癌Slolhaa胃の研究の乗算のバランス場合ひずみと効果を取り除く
گrvat。
ロシュ研究：MlitinがKromatoを仲介見つめگマヤのBa Karaa Bala-を絶賛が（逆に勝ちましたRP-HPLC）および活用のBaストーンC18 BL
BLホーネット花の蜂蜜エキスگRDID。Falit BioloژアキMlitin
BhosilaテストHmulitikバールロイگlbolhaaクリムゾン起因Astandar Mlitin研究گRDIDによって。MlitinバールZendeボーデンと乗算Slolhaa癌胃応答（AGS）の効果の監督評価
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結果 (日本語) 3:

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درمانى 彼らはクック مانند it تهاجمى と症状 هستند サイド外科的手術によって、ベンチャー協会 Chemi-con درمانى 撮影されて、全体的に امروزه
يافتن の自然 اثرات サイド اهميتاند كمتر の組み合わせでは、調査を獲得します。 ヴァンデルは彼の初期のキャリアの cm Zanbour 再蜂蜜、 پپتيد مليتين 26 酸
どこ秘書と جداسازى rid を締め、ラウド Zendeh ボーデンの本土のバランスの影響とそのコンパイラの仕入先 سلولهاى 癌 بررسى 解像度
گرفت を最大化します。
ロシュ بررسى ： مليتين 媒介 كروماتوگرافى مايع karaye 、 Waziri 、通りではありません逆にウォン（ RP - hplc ）とピースとなっているが、ストーン C 18
を開始